确保细胞培养快乐且健康是一件棘手的事情！识别健康以及死亡受损的细胞培养物是每个细胞培养爱好者都应该学习的重要基础技能。
细胞培养生长阶段
细胞生长主要分为延迟期、对数期、稳定期和衰退期4个时期，不同的生长时期表现出不同的代谢和生产能力。
在开始细胞培养之前切记细胞系生长特征，例如增殖率和接种密度。在培养中，细胞生长将遵循延迟期、对数生长期和稳定期的标准模式（如上图）。重要的是要认识到您的细胞培养物处于哪个生长阶段，以确保在实验中保持健康的细胞！
细胞培养期周
延迟期：解冻后，细胞开始适应新的培养条件，并将处于滞后期。滞后期的长度取决于细胞的应激程度和所使用的接种密度。对于贴壁细胞，贴壁通常在 24 小时内发生。
对数生长期：一旦细胞恢复并开始活跃分裂，它们就会进入对数生长期。此时应评估群体倍增时间和其他细胞特征。细胞通常在对数生长期后期在达到 100% 汇合之前进行传代。
稳定期：经过快速的生长与繁殖，细胞逐步进入稳定阶段，如果细胞过度拥挤，它们就会更容易受到损伤、衰老和凋亡。此时，细胞处于静止期，不到十分之一的细胞正在活跃分裂。
衰退期：培养基中的营养耗尽，代谢产物积聚，细胞进入衰退阶段，随着细胞死亡占据主导地位，活细胞群体数量减少。
细胞形态学
细胞形态描述了细胞的形状和整体外观，是细胞培养健康的重要指标。不正确的无菌技术可能会导致细胞系污染，因此最好在每次使用后检查细胞的形态。
1 贴壁细胞
形成附着于表面的单层细胞两个主要形态类别：
一，上皮样：多边形，固定。
二，成片生长成纤维细胞样：细长形，双极或多极，可以在基质上迁移。
2 悬浮细胞
在悬浮液中自由漂浮（无单层形成）
表现为单细胞或小细胞团
淋巴母细胞样球形
看起来分离且呈圆形但“可折射”的细胞是健康细胞
细胞培养物的死亡可能会令人失望和沮丧。这就是为什么尽早仔细观察细胞死亡迹象总是一个好主意，以便找出原因并有望防止珍贵培养物的进一步恶化。
3 死亡细胞
以下是细胞死亡的一些常见迹象：
细胞聚集的发生。细胞裂解后，DNA 和其他细胞碎片被释放到培养基中并与细胞聚集，呈现为小团块。
分离的、圆形的贴壁细胞和成团的悬浮细胞，看起来又小又黑。（分离且呈圆形但“可折射”的细胞是健康细胞）
添加台盼蓝后细胞染成蓝色。当细胞的细胞膜受损/受损时，台盼蓝能够进入细胞并对细胞内蛋白质进行染色。
细胞圆锯齿状或起泡。
细胞计数
为了准确了解细胞培养物的健康状况，您需要定期对细胞进行计数。细胞计数是日常细胞培养常规的重要组成部分，对于确定传代/接种所需的细胞浓度、监测细胞的生长速率以及评估药物处理后细胞的活力至关重要。细胞计数通常使用两种主要设备：血细胞计数器或自动细胞计数器。
细胞培养基/容器的成分
细胞培养基提供健康细胞生长所需的必需营养素、生长因子、激素和附着因子。缺乏理想营养成分的培养基可能是细胞附着和细胞培养活力较差的一个因素。
不同的细胞系有不同的营养需求。培养细胞时检查所用培养基的成分非常重要，以确保它是理想的培养基。例如，不同的基础培养基具有一系列的葡萄糖、氨基酸、维生素、盐和其他营养物浓度。缓冲液在维持培养基 pH 值方面也发挥着重要作用。根据生长环境中二氧化碳的含量，培养基中碳酸氢钠的含量可能会有所不同。最后，请注意血清对热敏感，较高的温度可能会使其中的生长因子失活。
最后，最好检查培养方案的离心速度和适当的蛋白水解酶浓度，以尽量减少细胞在培养过程中经历的压力。
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