高效去除游离多糖和游离蛋白，助力高纯度肺炎多糖蛋白结合疫苗生产

近日，生物制品学杂志发表了一篇选用博进生物的大孔疏水层析介质(GP-Butyl)高效去除9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物中的游离多糖和游离蛋白^[1]的文章，研究人员利用制备的9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物，比较分子筛、离子交换、疏水层析(GP-Butyl)、硫酸铵(ammonium sulfate,AS)盐析去除游离多糖的效果，并对筛选出的纯化方法进行优化，以期用于多价肺炎结合疫苗的制备。

文章概述：      

文章选用分子筛、离子交换层析、疏水层析(GP-Butyl)及硫酸铵(ammonium sulfate,AS)盐析法等方法分析对比，筛选出最有效去除9V型肺炎球菌(Pn9V)多糖蛋白结合物Pn9V-CRM₁₉₇中的游离多糖的层析方法。通过比较游离多糖百分比、多糖回收率及蛋白回收率筛选出，疏水层析(GP-Butyl)工艺方法可有效去除游离多糖并保证蛋白回收率，对确定的方法进行工艺优化。

9V型肺炎球菌(Pn9V)多糖蛋白结合物Pn9V-CRM₁₉₇纯化

疏水层析介质(GP-Butyl，购自苏州博进生物技术有限公司)

·缓冲溶液A：1.3mol/L硫酸铵，10Mmol/L磷酸盐缓冲液（pH6.5）

·缓冲溶液B：注射用水

·平衡线速度：60 cm/h

·洗脱线速度：120 cm/h

使用缓冲溶液A进行柱平衡，带紫外、电导值稳定后上样，待紫外280 nm监测值稳定时，用缓冲溶液B洗脱，紫外280 nm吸收峰上升时收样，下降至基线附近时停止。收集的样品采用100 KD膜包用0.9%氯化钠溶液超滤后收样，经0.2 μm滤器过滤后检测多糖、蛋白和游离多糖含量。

同时该文章通过对比不同AS浓度去除Pn9V-CRM₁₉₇结合物中游离多糖的效果，优化工艺为1.1mol/L AS上样，注射用水洗脱，层析介质载量为1.81mg蛋白/mL。

实验结论

文章通过对比四种不同的纯化工艺方法，发现使用疏水层析和离子交换层析均可将Pn9V-CRM₁₉₇结合物的游离多糖降至5%以下，疏水层析(GP-Butyl，购自苏州博进生物技术有限公司)多糖及蛋白回收率(34.7%和50.1%)高于离子交换层析(16.2%和25.7%),选择疏水层析去除结合物中的游离多糖。优化的工艺为1.1 mol/LAS上样，注射用水洗脱，层析介质载量为1.81 mg蛋白/mL。此纯化工艺方法对开发其他方面的多糖与蛋白结合疫苗同样存在借鉴意义，可广泛应用于结合疫苗领域。

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参考附录:当前肺炎结合疫苗市场进展

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参考文献：

[1] 9V型肺炎球菌多糖蛋白结合物中游离多糖去除方法的筛选及优化. 陈倩，陈中伟，马浩亮，詹远枫，闫瑾，孙述学北京成大天和生物科技有限公司,北京101111

[2]数据来源于网络公众号公开发表