间充质干细胞来源的外泌体（MSC-EVs）在再生医学和免疫调节方面显现出巨大的应用前景。已有研究表明MSC-EVs可促进皮肤细胞增殖，并加速上皮细胞再生，修复皮肤损伤抑制瘢痕形成；在骨关节炎疾病治疗领域，MSC-EVs可促进软骨基质合成和抑制基质降解酶作用来减缓骨关节炎进程；MSC-EVs还可以通过眼表滴入或玻璃体注射等方式给药，风险低且可有效渗透眼部组织结构发挥其治疗功能。然而，目前依然缺乏有效的和可拓展的制备细胞上清外泌体的方法，如何获得高浓度、高纯度、高活性的MSC-EVs是其用于疾病治疗研究与转化的关键。
EXODUS分离细胞上清样本操作步骤
细胞上清外泌体分离结果展示
1.EXODUS和超速离心法（UC）提纯细胞上清外泌体结果展示
分别使用EXODUS和UC对40 mL和38 mL细胞上清培养液外泌体进行分离提纯，并结合透射电子显微镜（TEM）、纳米颗粒跟踪分析仪（NTA）和Western blot等实验手段对纯化外泌体进行表征鉴定。结果显示，EXODUS纯化的外泌体具有完整杯托状结构且囊泡结构数量多，背景干净；UC纯化外泌体背景干净但囊泡结构数量少，有部分聚集现象。EXODUS纯化产物粒子浓度为8×10^10 particles/mL，UC纯化产物粒子数为8×10^9 particles/mL。通过等体积Western blot实验评估外泌体的产量，结果显示，EXODUS纯化产物外泌体相关标志蛋白丰度显著高于UC。以上结果表明，EXODUS纯化富集细胞上清外泌体产量显著高于UC。
2.EXODUS和切向流过滤（TFF）提纯细胞上清外泌体结果展示
Xcell Therapeutics Inc.,为了评估EXODUS和TFF设备在分离富集细胞上清外泌体的性能差异，分别使用EXODUS和TFF设备处理250 mL细胞上清培养液并结合NTA、BCA assay和等体积Western blot实验技术对纯化结果进行表征鉴定。结果显示，EXODUS产物粒子总数1.16×10^11 particles，显著高于TFF产物粒子总数。EXODUS纯化产物外泌体标志蛋白CD9，CD63和CD81蛋白丰度显著高于TFF纯化产物。以上结果表明，EXODUS纯化细胞上清外泌体产量显著高于TFF。
接着，研究者利用BCA assay和等颗粒Western blot实验技术评估外泌体纯度，结果显示，EXODUS产物总蛋白量显著低于TFF，EXODUS颗粒蛋白比为3.57×10^8 particles/μg protein，显著高于TFF。EXODUS纯化产物CD9和CD81蛋白丰度显著高于TFF纯化产物。综上结果表明，EXODUS纯化细胞上清外泌体的纯度和产量显著高于TFF。
应用案例 1
EXODUS分离A549细胞上清EVs，助力可听声波促进贴壁癌细胞EVs形成和分泌基础研究（Applied Materials & Interfaces . IF=9.500）
结果展示
研究者运用EXODUS提取系统完成AAW刺激组与静态培养组细胞上清EVs分离，并运用TEM、NTA和Western blot等技术对外泌体进行鉴定。TEM结果显示，静态培养和AAW刺激条件下，EVs都呈现经典杯状结构，且其粒径都落在30-100 nm之间；Western Blot检测Calnexin和外泌体标志蛋白结果显示，细胞和EVs中相关标志蛋白表达一致。
研究总结
研究者开发了一种新型EVs生物制造方法，通过调控AAW振幅产生的连续机械刺激，如表面声压和应力，显著提升贴壁癌细胞EVs的形成和分泌效率。相较于传统静态培养，72小时AAW刺激使EVs产量增长2.5倍，且对细胞活力无显著影响。研究团队利用汇芯生物自主研发的全自动外泌体提取系统EXODUS，成功分离出高纯度、高产量的EVs。通过组学分析和体外实验等技术手段，探讨了AAW促进EVs分泌的调控机制，并评估了AAW诱导衍生EVs的生物学功能。
应用案例 2
EXODUS分离人源脐带间充质干细胞外泌体，助推肝纤维化(LF)治疗机制研究（International Immunopharmacology. IF=5.600）
结果展示
作者运用全自动外泌体提取系统EXODUS，成功地从hUC-MSCs细胞培养上清培养液中分离出间充质干细胞外泌体MSC-Exos。并结合了TEM、NTA以及Western blot等多种外泌体鉴定技术，对提取的MSC-Exos进行了全面的形态、物理特性及标志物评估。TEM观察结果显示，MSC-Exos呈现典型的杯状结构且具备双层膜特征；NTA分析显示，MSC-Exos的平均粒径约为100 nm；Western blot结果显示CD9、CD81和TSG101蛋白条带显著。
研究总结
本研究发现hUC-MSCs通过抑制HSC活化可显著改善LF。并利用汇芯生物自主研发的全自动外泌体提取系统EXODUS，成功地从hUC-MSCs细胞上清样本中分离提纯出高纯度、高产量的MSCs-Exo，通过动物实验及体外表征等实验手段验证了MSCs-Exos 通过递送 miR-148a-5p 到达靶细胞，被认为 是hUC-MSCs 治疗的关键介质。其具体作用机制为直接靶向SLIT3从而调节纤维化进展。此外，SLIT3作为一种极具潜力的生物标志物，可用于动态监测LF的状态。
应用案例 3
EXODUS高效制备高纯度、高完整性的间充质干细胞来源细胞外囊泡（Anal Bioanal Chem. IF=4.300）
结果展示
研究者分别使用EXODUS、UC和聚乙二醇沉淀(PEG)方法进行MSC-EVs分离提纯，结合Western blot、TEM和NTA技术表征分离结果。Western blot检测了常见的EVs标记蛋白，如Alix、Mac-2bp、Flotillin 1、CD9和CD81。结果表明，EXODUS分离结果标志蛋白表达量显著高于UC与PEG。TEM结果显示EXODUS分离的EVs呈现为杯状结构，周围结合有与抗CD9共轭的纳米金。相比之下，EXODUS分离的囊泡膜结构完整更高，背景更干净。NTA结合Qubit蛋白检测试剂盒表征MSC-EVs产量与纯度，结果显示EXODUS总粒子数显著高于PEG和UC分离结果。此外，EXODUS分离的EVs的颗粒与蛋白质比为（1.54 ± 3.47）× 10^8 particles/μg protein，显著高于PEG和UC分离结果。以上结果表明，与PEG和UC方法相比，EXODUS平台纯化富集MSC-EVs拥有更高颗粒产量与纯度。
研究总结
研究者应用EXODUS高效地分离出高质量的EVs，其纯度和产量均超越传统的UC和PEG沉淀法。同时，研究者深入探讨了MSC-CM和纯化后EVs的保存条件。研究强调，维持MSC-EVs质量稳定至关重要，因为蛋白质组学分析显示，EVs蛋白质含量和多样性的变化将对其治疗功能产生显著影响。研究者提出利用EXODUS制备MSC-EVs的策略具有临床应用潜力，为治疗多种疾病开辟了新途径。
EXODUS全自动外泌体提取系统可高效地提纯高纯度、高完整性的外泌体，助力外泌体基础研究与干细胞外泌体应用与转化研究。目前，EXODUS处理细胞上清样本不仅实现了质的飞跃，更在处理量上取得显著提升，可完成从mL级别到L级别的处理体积全面覆盖，同时满足纯化富集的外泌体保持高纯度、高产量和高完整性。
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