逸漠千人计划(第七批) | 快来免费领取D-荧光素钾盐！

D-荧光素（D-Luciferin） 是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍应用于整个生物技术领域， 特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下， D-荧光素能够被氧化发光。  当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。将荧光素酶基因整合到预期观察的细胞染色体上，细胞便可持续稳定的表达荧光素酶。用标记好的细胞接种实验动物，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，可实时监测疾病的发展、药物的疗效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究， 包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素（游离酸），D-荧光素盐（钠盐和钾盐）。主要差别在于溶解特性：前者的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱，除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO；后者能够易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

● 体外生物发光检测

（1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成 30 mg/ mL 的储存液（100-200×），混匀。立即使用或分装保存，

避免反复冻融。

（2）用预热好的组织培养基将储存液稀释至0.15-0.3 mg/mL的工作液浓度。

（3）去除细胞培养基。待图像分析前， 添加荧光素工作液， 37℃孵育5-10 min， 然后进行图像分析。

● 活体成像分析

（1）用无菌的DPBS（无Mg2+、Ca2+） 配制15 mg/ mL 的荧光素的储存液， 混匀。

（2）用0.22um滤膜过滤除菌。立即使用，或分装保存，避免反复冻融。

（3）荧光素在体内扩散速度快，可采用腹腔注射或尾部静脉注射进入小鼠体内。腹腔注射扩散较慢，持续发光长，注射约1 min后可检测到发光，10 min后强度达到稳定的最高点，在最高点持续约20~30 min后开始衰减，最佳检测时间是在注射后15-35 min；若采用静脉注射，扩散快，但发光持续时间很短。荧光素的合适用量是150 mg/ kg，即体重20 g 的小鼠需要3 mg的荧光素。

注：建议对每种动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

（1）本品（firefly luciferin） 和甲虫荧光素（beetle luciferin） 仅仅是不同公司在命名上的差异， 都是指化合物（S）-2-（6-Hydroxy-2-benzothiazolyl）-2-thiazo line-4-carboxylic acid。

（2）注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的发射，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号平台期和最佳的检测时间。

（3）如果要进行ATP的检测， 尽量避免外源ATP的污染，如操作时戴手套并使用ATP-free 的实验耗材， 在进行荧光素的溶解时应使用ATP-free无菌水。

（4）本品要进行避光操作和保存。储存液过滤除菌后可分装于-20℃或-80℃冻存。如果有条件，可对储存液充入氮气或氩气(防止氧化)，保存时间长达1年。

（5）在进行D-荧光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS， 因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性，此外镁离子可能会对荧光素的氧化造成影响，从而影响检测。

（6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

（7）本产品仅作科研用途。

（1）注射底物量（D-Luciferin potassium salt）：150mg/kg body weight。

（2）成像时间：注射底物后1min，30min，60min。