二倍体细胞因无潜在致癌性、无动物源污染、且其生产的灭活病毒免疫原性高、免疫应答快、免疫持续时间长的优势，被广泛用于对抗破坏性的传染性病原体，包括麻疹、腮腺炎、风疹、脊髓灰质炎、甲型肝炎和狂犬病病毒等，此后其一直在疫苗开发中发挥着关键作用。
但二倍体细胞产量相对较低、生产难度大、疫苗成本相对较高，因此在助力二倍体细胞生产疫苗达到预期生产力的同时，还需要降低生产成本和减少血清的用量。
为了克服这些难题，康宁推出了一款针对二倍体细胞培养开发的减血清培养基，二倍体细胞减血清培养基（Diploid SRM）。该培养基具有增殖速率稳定、传代稳定、生长密度高等优点，适用于多种疫苗大规模工业化生产。
连续传代稳定性
将驯化好的MRC5细胞以6×104cells/cm2的密度接种在T75培养瓶中，添加含有3%和5%新生牛血清的康宁Diploid SRM，连续培养5代，每代培养周期为3天。
如图1所示，MRC5细胞在康宁二倍体细胞减血清培养基（Diploid SRM）中培养3天后，细胞总收获量约1.2×105/cm2，含3%新生牛血清组，细胞量略少。连续5代培养数据显示，细胞生长稳定，细胞活率均在93%以上，具有良好的传代稳定性，同时每代保持2的增殖倍数，这些对于疫苗生产中的操作以及产量都非常友好。
图1. 康宁二倍体细胞减血清培养基连续传代培养的MRC5细胞生长水平
A.细胞连续传代培养5代的细胞总量；B. 细胞连续传代培养5代的细胞活率；C. 细胞连续传代培养5代的细胞扩增倍数；D. 细胞连续传代培养5代的细胞倍增时间。
细胞放大培养
用康宁二倍体细胞减血清培养基（Diploid SRM）大规模培养二倍体细胞，将驯化好的MRC5接种至康宁2层细胞工厂CellSTACK中，添加培养基，观察细胞生长情况。MRC5细胞接种密度为5×104cells/cm2，持续培养至细胞汇合度达95%以上时进行收获。
如图2所示，在康宁二倍体细胞减血清培养基中生长的MRC5细胞，接种密度5×104 cells/cm2，培养4天，细胞生长汇合度达到95%以上，此时细胞形态与培养瓶中细胞形态相近。细胞收货量可高达约1.0×105/cm2，细胞活率均在95%以上，扩增倍数为2倍，由于在细胞工厂中培养细胞略与培养瓶中不同，因此细胞倍增时间略有延长，但增值倍数仍然保持在2的倍数。
图2. 康宁二倍体细胞减血清培养基在细胞工厂中培养的MRC5细胞生长水平。
A. 细胞工厂中的MRC5细胞形态；B.培养4天后的细胞总量；C. 培养4天后的细胞活率；D. 培养4天后的的细胞扩增倍数；E. 培养4天后的的细胞倍增时间。
结论
康宁二倍体细胞减血清培养基可以支持二倍体细胞高密度接种（可以支持二倍体细胞增殖至单位面积1.0×105/cm2以上），及连续稳定的传代扩增；可以支持二倍体细胞生长速度稳定，不会因为过快增殖而导致细胞分裂代次过高，而影响后期疫苗生产使用。
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