组织被冷冻时，组织中的水变成冰，而在这种状态下，组织变坚硬。冰冻块的硬度可通过改变组织温度来改变。降温会使组织块更加坚硬，提高温度使组织变软。大多数非脂肪不固定组织的切片最好在-20到-25℃制作。