鼻病毒C(human rhinovirus C,HRV-C)其在标准细胞系中难以培养的特性,长期以来成为了国内外学者深入探究其致病机制和防治策略的巨大阻碍。
鼻病毒 C(HRV - C)的培养一直是医学研究中的难题,长期以来缺乏有效的培养体系。传统的细胞系难以支持其生长和复制,这极大地限制了对该病毒的研究以及相关疫苗和药物的研发。
在早期的研究尝试中,科研人员曾利用手术切除的鼻窦黏膜和鼻息肉等初级组织来培养 HRV - C。虽然在个别情况下成功实现了毒株的培养,但这种方法存在诸多弊端。不同捐赠者的组织样本差异显著,导致病毒生长极不稳定;组织获取途径有限,难以满足大规模研究的需求;实验过程难以标准化,使得实验结果的可靠性大打折扣;而且组织在实验期间容易发生降解,进一步增加了研究的难度。因此,这种利用初级组织培养 HRV - C 的方法无法成为一种通用且有效的研究手段。
近年来,类器官培养技术的发展为 HRV - C 的培养带来了新的希望。香港大学 Jie Zhou 研究团队在这方面取得了重要突破。他们利用此前构建的人类呼吸道类器官培养系统开展研究。该系统能够高效地从原代肺组织中获取类器官,并使其在长达半年的时间里稳定扩增。通过特定的分化方案,这些类器官可成熟为与天然气道和肺泡上皮极为相似的气道类器官和肺泡类器官,其中鼻类器官因其无创获取的优势以及对上部呼吸道上皮的出色模拟能力,在研究中发挥了关键作用。
在具体的实验过程中,研究人员首先对气道类器官进行 HRV - C 感染实验。他们选取了 9 份病毒载量各异的 HRV - C 阳性鼻咽标本接种到气道类器官上,结果有 8 份成功引发病毒增殖,证明气道类器官对 HRV - C 具有一定程度的易感性。然而,在后续的病毒连续传代实验中,未经过特殊处理的气道类器官遇到了阻碍,无法完成传代。经过深入研究发现,这是由于 HRV - C 感染引发了气道类器官强烈的抗病毒反应,从而阻断了病毒的连续传代过程。为解决这一问题,研究团队引入了 CYT387,这是一种用于治疗骨髓纤维化的药物,其作用机制是抑制干扰素及干扰素刺激基因的表达。在 CYT387 的干预下,气道类器官成功实现了 HRV - C 的连续 5 次传代,并且子代病毒依然保持着较强的感染能力,为后续研究提供了稳定的病毒样本。
与此同时,鼻类器官的研究也取得了显著成果。鼻类器官在细胞组成上与气道类器官有相似之处,但在模拟上呼吸道上皮的精准度方面更胜一筹。重要的是,鼻类器官无需借助额外辅助手段,就能够自发地支持 HRV - C 的连续传代。研究人员对不同亚型的 HRV - C 进行了全面测试,鼻类器官在每次测试中都表现出出色的病毒培养能力。在不同温度条件下的培养实验中,鼻类器官同样展现出了卓越的稳定性,病毒基因组在传代过程中始终保持稳定,为深入研究 HRV - C 的生物学特性提供了可靠的模型基础。
通过对气道类器官和鼻类器官的对比研究,科研人员发现两者在应对 HRV - C 感染过程中存在显著差异。鼻类器官对 HRV - C 的敏感性明显更高,能够为病毒的复制提供更有利的环境,从而支持更活跃的病毒复制过程;相反,气道类器官在感染后会迅速启动更为强烈的先天免疫反应,这一结论通过严谨的 RNA 测序和 Poly (I:C) 刺激实验得到了充分验证,为进一步理解病毒 - 宿主相互作用机制提供了关键线索。在病毒感染机制的深入研究方面,科研人员还发现 HRV - C 受体 CDHR3 在气道和鼻类器官的纤毛细胞顶表面呈现高度表达状态。通过运用抗体阻断 CDHR3,能够显著抑制病毒在鼻类器官中的生长,这一发现为抗病毒治疗策略的研发提供了新的靶点方向。此外,研究团队经过大量筛选工作确定的两种抗病毒药物也在实验中显示出对 HRV - C 的有效抑制效果,并且成功建立了基于类器官的免疫荧光测定法,实现了对 HRV - C 感染性粒子的精准定量,为病毒感染的检测和监测提供了有力的工具支持。
培养物(液)质控品、参考品
常规规格:0.5ml、1ml、5ml
出厂浓度不低于≥10^5TCID50/mL
单位:拷贝数(copies/mL)、PFU/mL、TCID50/ml、ug/ml(具体单位依产品而定)
注:
◆PFU是病毒的计量单位。
PFU:plaque forming unit,空斑形成单位。感染性滴度的单位一般表示为PFU/ml。由于测定pfu往往重复性较差,因此近些年许多研究又开始采用TCID50方法来计算病毒的感染单位。因此建议也可使用TCID50法。
◆单位的换算:PFU/mL约等于0.7*TCID50/mL(不建议换算)。
◆假病毒多以拷贝数为单位,其他多以TCID50/ml为单位,拷贝数单位不能与其他单位换算。
◆灭活方式有热灭活和化学灭活(β-丙内酯灭活、甲醛)的方式。
◆部分培养物是将病毒的基因组整合到239基因组上进行培养,可以将其视为含有病毒全基因组的稳定细胞系。
◆部分提供溯源信息。VX:AAXU55