产品描述:
STEM-CELLBANKER ®是GMP下生产的ES细胞和iPS细胞冻存液 产品特点是化学成分清晰,无动物源成分,专门针对ES细胞和iPS细胞特点设计的细胞冻存液。STEM-CELLBANKER ®是*无血清和动物源性成分的,所有成分*欧洲药典或美国药典的要求,是干细胞治疗和应用合适的细胞冻存液,STEM-CELLBANKER ®使用方便,不需要特殊设备和仪器就可以实现干细胞高存活率的冻存和长达10年以上的长期保存。
STEM-CELLBANKER ®还显著增加细胞活力,同时保持细胞多能性,和细胞的正常核型和增殖能力,是一般冻存液无法达到的。
产品特点:
1)化学成分清楚和无动物源成分
2)按照日本,欧盟,美国和PIC/SGMP指南生产
3)复苏后保持细胞的高活力
4)解冻复苏后依然保持干细胞的多能性
5)实现细胞的长期冻存,不管是-80度还是液氮保存都可以保证活性10年以上
6)可以不需要液氮就可以长期保存
7)同样可以适合组织冷冻保存及其他珍贵细胞冻存
8)STEM-CELLBANKER 已经得到美国食品药物管理局的认证(生物制品评价和研究中心)
STEM-CELLBANKER ®是*无血清和动物源性成分的,所有成分*欧洲药典或美国药典的要求,是干细胞治疗和应用合适的细胞冻存液,STEM-CELLBANKER ®使用方便,不需要特殊设备和仪器就可以实现干细胞高存活率的冻存和长达10年以上的长期保存。
STEM-CELLBANKER ®还显著增加细胞活力,同时保持细胞多能性,和细胞的正常核型和增殖能力,是一般冻存液无法达到的。
应用实例:
图1 STEM-CELLBANKER对人体胚胎干细胞(hESC) 和诱导多能(iPS)干细胞进行冻存测试
测试冻存液:STEM-CELLBANKER冻存液 vs 常规细胞冻存液(细胞培养基 + 10% DMSO + 血清代替品)
细胞存活率评估方法:trypan Blue 和 Live/Dead assay kit试剂盒
测试结果:使用STEM-CELLBANKER冻存液的细胞存活率明显提高,HS293, HS306 and ChiPSA 分别高达93%、96% 和90%,比只有50%存活率的常规细胞冻存液高一倍。同时,结果也显示STEM-CELLBANKER冻存液没有给细胞的增殖、分化和染色体组形带来影响。
图2.将小鼠肾脏切碎成约5平方毫米。将组织样品或者立即固定用10%福尔马林或冷冻保存与在-801毫升STEM-CELLBANKER的ø C一周。冷冻保存的样品在解冻后立即用10%福尔马林固定。两种样品的石蜡切片用H&E或抗活性半胱天冬酶3抗体染色。在新鲜和冷冻保存的组织样品中,坏死或细胞凋亡的迹象都可以忽略不计。在来自各种小鼠器官的组织样品的情况下获得了类似的结果。
图3.总RNA从小鼠肺成纤维细胞系的任收获后立即或在-80与STEM-CELLBANKER冻存后的细胞中提取ø C一周和解冻。通过DNA微阵列分析比较两个样品中的mRNA水平,结果显示93%的mRNA在±1.6倍差异的范围内。
细胞株:129SV (Mouse ES cell)
测试冻存液:ZENOAQ 产品(CELLBANKER 1, 1plus, 2 和 STEM-CELLBANKER)
常规自培冻存液(90% FBS+10%DMSO 和 90% culture medium + 10%DMSO
操作流程图:
使用手册:
细胞冷冻保存方法
选择冻存处于对数生长数的细胞有助于提高复苏细胞存活率。
1. 按照常用方法收集悬浮细胞或贴壁细胞于试管中。
2. 按照培养细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存细胞数。
(参考:5×105 至 5×106 cells/ml)。
3. 取相当于所需细胞数的细胞悬浮液量,置于离心管中,离心收集培养细胞(参考离心条件:1,000~2,000rpm,4℃,3至5分)。移去离心管中的上清液。
4. 加入适量的CELLBANKERⓇ 细胞冻存液于离心管中,使细胞浓度为 5×105 至 5×106 cells/ml。缓慢地混合均匀,制成细胞混合液。
5. 将离心管中的细胞混合液分装于已标示*的冷冻保存管中。
6. 直接将含细胞混合液的冻存管放入-80℃冰箱,长期冷冻保存。
7. 若研究者需要液氮保存时,可将*冻结的冻存管(放入-80℃冰箱后至少一昼夜)移至-196℃液氮罐。
冻存细胞复苏方法:
1. 从冰箱里取出细胞冷冻保存管,立即放入37℃ 振动水浴槽中快速解冻。
2. 待冻存管中细胞混合液*融化后,立即加入1ml细胞培养基于该冷冻管中与细胞混合,再将细胞混合液从冻存管中移入含有9ml该细胞培养基的试管中,混合均匀。
3. 离心收集培养细胞((参考离心条件:1,000~2,000rpm,4℃,3至5分),移去上清液。
4. 清洗细胞,充分洗净残留冻存液。
5. 加入适量的新鲜细胞培养基,使用移液管缓缓地均匀细胞混合液。适量地稀释后,将细胞混合液移至事先准备好的培养瓶中。
6. 镜检后,研究者可根据各自方法和需要来进行细胞培养。
储存方法和保质期
储存于4℃以下。 保质期3年。3个月以上没有使用CELLBANKER冻存液的计划时,尽可冷冻保存。为避免重复冻结-解冻过程可能导致的CELLBANKER品质下降和性能降低,推荐将 100mL 产品分装小瓶后,再存放于 4℃以下或-20℃冰箱冻存。
质量保障承诺
1. STEM-CELLBANKER 细胞冻存液经过严格内毒素、pH、渗透压和微生物检查,确保产品不含细菌、霉菌以及支原体。
2. 使用小鼠胚胎干细胞(Mouse ES Cells)、Jurkat 和SK-007细胞验证性能测试冻存细保存活率达80%以上。
检测项目 | 检测结果 |
内毒素(Endotoxin) | 小于20EU/ml |
支原体(Mycoplasma) | 无 |
pH | 7.0-8.5 |
容量渗透压(Osmolarity) | 低于1800 mOsm |
微生物检查(Sterility) | 无 |