TCET 操作步骤
1. 挑选外阴部肿胀的发情期雌鼠，与结扎公鼠1:1在下午17:00合笼，次日上 午8:00检查阴道栓，见栓者记为假孕0.5d,2 天后即假孕2.5d 雌鼠作为胚胎 移植受体。
2. 在90mm 培养皿做若干100μL 的含0.4%牛血清白蛋白的含钙镁PBS 液滴， 将胚胎洗涤干净后依据受体数量将胚胎分组，每只受体可移植5-15枚胚胎， 利用吸胚管将每组胚胎紧密聚集在一起。
3. 左手抓住 TCET 密封管，右手抓住TCET 手柄，体视显微镜调至最低倍，首 先用TCET 吸取6mm PBS 液和3mm 气泡，再吸取胚胎，含胚胎的液体段 长度控制在5mm 以内，最后再吸取3mm 气泡，最终，蓝色手柄与蓝色密封 管之间的推杆长度控制在17mm-20mm 之间。在吸取胚胎的时候，尽可能让 TCET 前端直立吸取胚胎。
4. 在纤维冷光源侧面吸附一条宽10mm 长100mm 的磁铁(也可采用其他方法), 将装好胚胎的TCET 手柄直立吸附在磁铁上，静置90秒以上，让胚胎下沉 至液柱与气泡的连接处。
5. 假孕2.5d受体小鼠腹腔注射阿佛丁麻醉(每10g体重注射0.2mL), 利用左 手拇指和中指固定小鼠尾根，右手持开腔管蘸取少量PBS 液后缓慢插入小 鼠阴道，在纤维冷光源下确认子宫颈口并用婴儿棉签擦拭，清洁子宫颈口。 随后用右手食指自上而下捋一捋小鼠腹部多次，尽可能让子宫角平直。
6. 右手持装有胚胎的TCET, 将TCET 前端在PBS 液中浸润后经子宫颈口缓 慢插入任意一侧子宫角(尽量将TCET 的顶端偏向右侧，则大概率进入右侧 子宫角),通常TCET 能够轻松流畅地进入子宫内。如果感觉有任何阻力， 立即停止。极个别小鼠的子宫颈口可能很紧，可用一个未装胚胎的TCET 提 前疏通一下子宫颈口，疏通深度不可超过5mm。
7. 左手将蓝色手柄和鼠尾固定在一起，右手捏住TCET 密封管，首先左手下压 手柄5mm 左右，随即右手捏住TCET 密封管和开腔管快速后退。小鼠剪耳 缺口标记并置37度热台至苏醒。
注意事项
1. 胚胎移植之前，最好先用几只成年雌鼠模拟练习TCET 的操作方法。
2. 受体小鼠必须麻醉，否则妊娠率和产仔率会显著下降。
3. 推荐使用8周龄以上，体重26g 以上的假孕2.5d的 CD-1 或昆明雌鼠作为胚 胎移植受体。
4. 所移植胚胎的发育阶段必须是桑椹胚或囊胚，且胚胎仅能被移植至单侧子宫 角。
5.TCET 移植器为一次性使用，如果反复使用，产仔率会有所降低。TCET 移 植器必须缓慢插入子宫颈，最好一次完成，如遇阻力，立即停止，不可反复 插入。
6. 自 TCET 插入至拔出，整个过程尽可能控制在40秒以内。
