黑胶虫污染,还会传染其他细胞

 
点击 23回复 0 原帖 2023-11-16 13:02 IP属地 江苏南京

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最近实验室的细胞房:
从某细胞库买的细胞,细胞刚到的时候,观察均生长良好,密度适中,培养液清亮,也没有见小黑点,但是对细胞传代以后就陆续出现多少不等的小黑点,有时候在一夜之间暴长,给培养液加抗生素,也无济于事,对贴壁细胞用生理盐水及D-hanks液冲洗七遍后见减少,但是随后几天又出现。

  • 刚开始怀疑操作有问题,但是有经验的老师操作也出现这种问题,陆续对培养液,血清及胰酶进行培养也没发现问题。

  • 同时培养箱也有本实验室保存的3T3细胞进行培养,生长快,很快铺满,仔细观察也可以见到少量的黑点。
  • 后来又从其他细胞库买的Hela细胞,没有使用自己的血清,直接吸出多余的培养液后,进行培养,传代后用原来吸出的培养液进行培养,同样发现了问题。

之前有各种关于小黑点的传说:
1、玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西(曾经有文献报道过);
2、据说这是黑胶虫,又有人说是原生动物,好像也没个统一的说法;
3、据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫,似乎和草履虫和变形虫有类似之处,然而由于经费不够而不能继续进行下去;
4、也有人说是纳米级的细菌。
5、我们定义的“黑胶虫”,是可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代,“黑胶虫”与细胞竞争性生长,会增多,且在原地跳动。

我司研究人员多年潜心研究证实‘’黑胶虫‘’的确是一种病原微生物,并且研发出一款专治这种微生物的产品黑胶虫去除剂(Nabact™ Rid)
  • 推荐Nabact™Rid产品的稀释比例为1:800-1000,例如:5 mL培养基加入 5-6 μL的Nabact™Rid;

  • 弃去旧的培养基,用PBS将细胞清洗干净,再加入新鲜的含有Nabact™Rid的培养基,2天1次,连续处理3个周期。

黑胶虫是怎么存在的呢?

  • 黑胶虫可寄生于动物细胞,也可以生存于培养基中,依靠细胞和培养基中的营养为生,并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长,开始时对细胞没有什么影响,但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候,细胞生长就会受到影响直至死亡,严重影响了实验人员的实验进展。

  • 所以黑胶虫污染常在细胞复苏、培养条件改变、细胞接种密度低及细胞状态不佳时出现,从而导致科研人员实验无法进行下去。

黑胶虫污染来源:

  • 细胞本身携带污染;
  • 特别是原代细胞极易携带黑胶虫污染,主要是从动物组织样本携带污染造成;
  • 培养箱污染,被培养箱内其他有黑胶虫污染的细胞传染。

总结一下,究竟什么是黑胶虫呢?
细胞培养过程中,在显微镜下能看到一些小黑点,这些小黑点可以呈点状,也可以成碎片状,一般在原地振动(即:在原点来回做布朗运动)。抗生素药物对其均无效,一般即可判断为黑胶虫。

秘密武器来啦(预防和处理细胞黑胶虫污染,要从外到内的清除):

  • 注意好实验环境,保证细胞间的洁净度,推荐“ZoFtic™细胞房除菌剂”。
  • 保证培养细胞所处的环境的洁净度,培养箱也要定期灭菌处理,推荐“ZoFtic™培养箱除菌剂&ZoFtic™培养箱水盘抑菌剂”。
  • 已经污染的细胞,建议在换液的时候用PBS多洗几遍;若是悬浮的话,可以向其中少加一点滋养细胞(从小鼠腹腔内取的巨噬细胞,这种细胞不分裂,过一阵就死掉了,做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道,可能比较麻烦些)加滋养细胞对有黑胶虫污染的刚复苏的细胞很有效。最好的办法就是用“黑胶虫去除剂Nabact™ Rid”,快速又方便;预防黑胶虫污染我们还有“黑胶虫预防剂PreNabact™Rid

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