荧光定量,不得不说的几个事!

 
点击 18回复 0 原帖 2023-11-13 12:00 IP属地 江苏南京
实验室小伙伴们对荧光定量的印象,首先是:技术先进,总是和好文章相关;其次是:贵(仪器贵,试剂贵)和神秘(被导师警告只能高年级师兄师姐通过申请才能做的这类实验)。看得见,却摸不着,能发好文章,却被限制使用,荧光定量实在藏着太多的秘密!

荧光定量到底是什么样的实验?技术诞生二十多年了,为什么价格还那么高?
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   秘密一:qPCR技术本质其实是“普通PCR+光学监控系统” 


qPCR技术原理通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。qPCR本质上是普通PCR加上一套光学观察系统,普通PCR类似电影剧终时的一张照片(PCR扩增结果),qPCR则是完整的全部电影(PCR的全过程)。不同的检测目的,需要不同的荧光定量PCR仪器及与之对应的qPCR mix。qPCRmix的类型大致可以分为以下几个类别。

   秘密二:荧光定量仪器只能使用厂家配套的qPCRmix吗? 

荧光定量PCR的神秘感,完全是人为因素造成的!

 

A、导师说:仪器贵啊,不要随便动qPCR仪器!
首先,qPCR仪价格昂贵,动辄几十万一台!很多实验室都会叮嘱学生不要乱动qPCR仪器,甚至有些实验室会把仪器锁上,只有高年级的师兄师姐通过多次申请,才能使用低年级学生只能在旁边观看学习。其次,有些实验室经费紧张,没有qPCR仪器,只有特别重要的实验,才申请使用公用qPCR仪器进行实验!再次,qPCR实验一般需要先提取RNA和反转录实验,试剂成本高、实验难度大!
qPCR在实验室愈显高端”“上流,锁在房间里的qPCR仪器更显神秘!此外,由于仪器的不同,有些会用到ROX染料修正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差,而有些不用,客户便会很困惑(其实这个就是根据仪器选择对应的试剂,下文会介绍)。

 

B、进口品牌仪器厂商说:我们的仪器和试剂必须配套,效果才能最好!

实验室在最初花费大额经费购买PCR仪器时,也被强制性的购买了配套的试剂。我们的仪器必须和我们的试剂配套!”“原配的试剂效果稳定,使用其他的试剂了问题,我们不负责!。昂贵的仪器已经买了,试剂贵点也算合理吧!当实验室测试成功,测试成功后就别折腾了,好不容易稳定的体系。实验室老师如是说。

 

C、进口品牌代理商说:进口稳定靠谱,国产的不行

国内被高度垄断的qPCR市场,进口品牌拥有无与比拟的话语权。十多年来,客户使用进口的仪器和试剂,接受指导进口品牌的技术指导,看的是进口品牌代理商的广告,也就习惯了高价:这个实验本身就这么贵!国内厂商突破层层技术封锁,在qPCR上技术终于成熟,而价格却只有进口的几分之一,兴冲冲的拿到市场。而市场(进口品牌代理商)却说:进口稳定靠谱,国产的不行,不知道什么时候就会出问题!


qPCR技术已经诞生二十多年,国内的qPCR仪器和试剂技术早已成熟,市面上简单快速的RNA提取试剂盒和一管化反转录试剂盒的开发, qPCR实验已不显那么昂贵和困难!qPCR实验的迷雾已经吹开,被锁住的实验需要放开了!

 

当国内没有qPCR技术时,进口厂商拥有定价权,我们只能硬着头皮接受。经多年的研发和多年的市场检验,qPCR技术国内已经成熟。仪器和试剂必须配套?对于一种通用常见的实验,这简直是个笑话,针对仪器开发试剂也并不是很难的事情。技术已经成熟,进口品牌十几年的超额利润时间,该结束了!原配试剂太贵了,而且也不一定好!荧光定量试剂的真实价格,该显现了!



qPCR实验部分和普通PCR的实验并没有多少差别,但价格怎么差那么多呢?上图荧光定量试剂成本并没有给出答案。这个试剂贵的不是成本,而是技术壁垒和市场话语权。

国内荧光定量技术已经成熟,进口品牌十几年的超额利润时间,该结束了!

经多年科研攻关图片图片,终于突破国外厂商的专利封锁图片图片,北京聚合美研制的抗体法荧光定量Mix,具有超快速度,高特异性,高灵敏度,重复性好,定量准确,全封闭化反应杜绝污染等优点。聚合美进场,让荧光定量试剂不再那么昂贵,已经为北大、清华、中科院、中国农大等单位很多实验室节约大量经费,受到客户的热烈欢迎!


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