细胞染色专题——荧光染料选择指南
细胞培养后，需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行观察。由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前，已有多种研究细胞的技术，从光学显微镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法。细胞染色是研究细胞生物学特征的一种常用手段，然而，对于细胞实验新手来说，想要获得一张漂亮的细胞染色图并不容易。染色试剂不会选、细胞染色不均匀、染色时切片脱落等都是很常见的问题。今天小爱就为大家整理了几种常用细胞染色方法及染色剂选择指南，快来学习！
表1 几种常用细胞染色方法及特点
了解细胞染色方法后，下面小爱向大家介绍研究不同细胞结构用到的荧光染料。
表2 细胞膜常用染料及荧光颜色
货号 | 产品名称 | 荧光颜色 | λEx(nm)/ λEm (nm) |
DiD对氯苯磺酸盐 | 红色 | 644/663 | |
DiR碘化物 | 深红色 | 748/780 | |
DiO高氯酸盐 | 绿色 | 484/501 | |
DiI高氯酸盐 | 橙色 | 549/565 |
表3常用细胞染料
货号 | 产品名称 | 规格 |
DAPI染色液 | 10ml/50ml | |
台盼蓝染色液（0.4%） | 50ml/100ml | |
姬姆萨染液 | 100ml/500ml | |
Hoechst 33342 | 10ml/50ml | |
JC-10 | 1mg/5mg | |
TRITC-Phalloidin | 300T | |
(+)生物素-N-琥珀酰亚胺基酯 | 100mg/250mg |
※ 避免反复冻融，否则容易失效；
※ DAPI对人体有刺激性，注意适当防护；
※ 鬼笔环肽具有毒性，需小心操作（对人的半数致死剂量 LD50约 2mg/kg）。
参考文献
[1] Li J, Chen JN, Peng ZX, et al. Multifunctional Electrospinning Polyhydroxyalkanoate Fibrous Scaffolds with Antibacterial and Angiogenesis Effects for Accelerating Wound Healing[J]. Applied Materials & Interfaces. 2022.
[2] Li T, Ren TY, Huang CM, et al. YS100A16 induces epithelial-mesenchymal transition in human PDAC cells and is a new therapeutic target for pancreatic cancer treatment that synergizes with gemcitabine[J]. Biochemical Pharmacology 189 (2021) 114396.
A: 一般情况下先用鬼笔环肽对细胞骨架进行染色20~40分钟，PBS清洗细胞2次，再用DAPI复染10~20分钟。可根据实际染色情况缩短或延长时间。 A: 染色时应注意滴加量不要太多，否则会造成整张图像呈现蓝色背景，只需覆盖上薄薄的一层即可。此外，荧光染料存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。 A: DAPI相对很容易染上色，避光处理时加样等操作短时见光没有关系，但是不操作的时候需要暗盒或锡纸包裹，染色后应尽快检测。 A: 可以选择TRITC（橙红）或是Fluor 700（远红）标记的鬼笔环肽。 A: 主要是荧光基团的差异，激发不同的荧光颜色，用来区分共染时其他荧光染料的颜色，选择时应满足机器激发和发射波长。 A: 鬼笔环肽不能直接应用于活细胞的染色，因为它无法穿越细胞膜。DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。
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