Matrigel基质胶的选择和注意事项

 
点击 23回复 0 原帖 2023-10-30 12:37 IP属地 江苏南京

细胞外基质是特殊的复合组成,可以稳定组织,促进细胞贴壁并通过与细胞外受体的相互作用调节细胞的功能。这一类ECM对于多种细胞的培养,功能,生长,以及细胞分化中都有重要的作用。Corning基质胶是从EHS小鼠肉瘤中分离得到的一类ECM,并被广泛应用于基底膜的制备。基于基质胶的组成及特性,基质胶对于体外模拟细胞体内生长环境提供了非常重要的支持。



小TIPS:

Matrigel胶之前是BD旗下Biocoat产品线的注册产品,几年前BD将Biocoat产品线整体销售给Corning公司,现在是Corning旗下Biocoat产品线的产品,所以我们常说的BD的基质胶和corning的基质胶其实是同一个产品。

Matrigel 主要有常规标准型(Standard)、高浓度(HC)、无酚红(Phenol red-free)、生长因子减量型(Growth factor reduced, GFR)和人胚胎干细胞专用(hESC-qualified)几个类别。

· 标准型 Matrigel:浓度范围大致为 8-12mg/ml;

· 高浓度 Matrigel:浓度范围大致为 18-22mg/ml;

· 无酚红 Matrigel:不含酚红,产品完全融化后颜色透明;

· 生长因子减量型 Matrigel:Matrigel 里包含的生长因子经过减量处理;

· 人胚胎干细胞专用 Matrigel:经过对 hESC 培养的测试,可以用于人胚胎干细胞的培养。

不同类型的Matrigel可满足不同实验需求,根据应用不同推荐使用不同货号的产品:

保存方式:

干冰运输,收到产品并确认到货情况无异常后,请将 Matrigel 储存于-20冰箱,长期保存可置于-80冰箱。切勿将 Matrigel 储存于自动除霜的冰箱中。在第一次融化后请分装保存,应避免Matrigel 反复冻融。


常见问题:

1.Matrigel 颜色为什么会有不一样?

无酚红 Matrigel 没有颜色,完全融化后应是透明的;含酚红 Matrigel 颜色可以在明黄色至暗红色之间变化,这些颜色变化是正常现象。因为酚红存在时,在温度、pH 不同的情况下液体会出现颜色的差异。

-20℃ 或酸性 pH 下为橙黄色

-20 -0℃间为颜色 橙色/桃红色

在生理 pH 0℃以上时为红色颜色不同是正常的;并不会影响产品效率,在5% CO2 、37ºC条件下会平衡。


2.如何分装 Matrigel?

建议根据您一次的使用量做小量分装。请注意与 Matrigel 接触的所有耗材如枪头、管子均 需事先预冷,且在冰上无菌操作。分装后的 Matrigel 可保存在-20或-80冰箱。建议保留瓶子的标签或记录下货号(Catalog Number)及批次号(LOT number),以便后续查询追踪相关信息。


3.融化后 Matrigel 应该是什么样的?

标准型 Matrigel 融化后应为澄清的液体,无酚红的为澄清且透明;蛋白浓度越高,融化后液体越粘稠。


4.如何稀释 Matrigel?

一般可用预冷的无血清培养基或 pH7.4 的 PBS 稀释。由于批次之间的浓度差异,除 354277外,推荐按照特定的工作终浓度稀释,而不要以比例或稀释倍数稀释。


5.. Matrigel 使用浓度?

凝胶浓度:在需要 Matrigel 凝胶的实验中,工作浓度需大于 3 mg/mL;包被浓度:包被实验时 Matrigel 无需成胶,因此包被浓度应小于凝胶浓度(即 3mg/mL),工作浓度需要根据具体的细胞类型进行预实验测试。对于侵袭实验,建议初始浓度设置在200-300 μg/mL 之间,再根据特定的实验体系进行优化;血管生成实验浓度:请务必使用大于 10 mg/mL 的 Matrigel 产品,康宁提供挑选批次和批次预留的服务,请您在订购产品时向代理商说明您的要求;体内皮下注射实验浓度:由于是体内实验,为了避免成胶不完全,建议终浓度在 4 mg/mL以上。


6.Matrigel 浓度去哪儿查询?

可以在康宁官网,输入货号,选择 quality certificate 按钮。或者直接点击以下网址:https://www.corning.com/asean/en/products/life-sciences/resource-library.html 进入质检证书查询页面,输入货号与批号,点击查找,获得相应 COA 文件。该文件中有蛋白浓度的说明;

或联系我们的销售人员帮您查询。


7.使用 Matrigel 时需要注意哪些方面?

所有接触 Matrigel 的试剂耗材产品都需要预冷,操作过程应全程在冰上操作,确保低温环境。Matrigel 对温度十分敏感,一旦超过 10,即开始凝胶。


8.Matrigel 凝胶铺板使用量是多少?

薄胶(Thin Gel):50μL/cm2,常应用于细胞附着和增殖;厚胶(Thick Gel):150-200 μL/cm2,常应用于 3D 细胞培养;


9.如何从 Matrigel 中收获细胞?

推荐使用康宁 Dispase 或 Cell Recovery Solution 产品。Corning Dispase 相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液,不会损伤细胞或细胞表面蛋白。此外,Corning Dispase 还可用于组织分离。对于代谢研究和 RNA 抽提,建议在 4使用 Corning Cell Recovery Solution 进行非酶反应的细胞收获,因为 Corning Matrigel 中含有痕量的 RNA,进行 RNA 分析时,应设置仅含有Matrigel(不接种细胞)的阴性对照组。


10.Matrigel 包被后的培养器皿能存放多久?

包被过的培养器皿最好当天使用,具体情况取决于实验目的。在需要保存的情况下,Matrigel 包被之后的培养器皿可以于 37 恒温箱或 4 冰箱中放置最长一周的时间。保存时培养表面需要保持湿润,请勿将包被工作液从培养器皿中吸出。(稀释后未用完的 Matrigel 不建议保留再用)。


11.凝胶后的 Matrigel 能否融化后再使用?

Matrigel 一旦成胶,是很难完全恢复的。可以尝试将 Matrigel 埋在碎冰中,放入 4冰箱,24-48 小时后观察能否融化。请注意,对于该处理方式后融化的 Matrigel,其性能是无法保证的。


12.侵袭实验中,Matrigel 铺板几个小时,为什么不会成胶?

在侵袭实验中,使用 Matrigel 的目的是包被小室表面,形成一层基质蛋白薄膜来模拟细胞外基质,其使用浓度小于 3mg/ml,没有达到成胶浓度,是不会成胶的。


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