江莱生物 | 做好这几点，你就是ELISA大神！
ELISA实验步骤少，流程短，购买的即用型试剂盒也都有指导性很强的操作说明书，单次实验 3-6 小时即可得到结果，实验小白也可以很快上手。
但是，各位江米们可不要轻视哦，ELISA和WB、IHC等基础免疫实验一样，都是易学难精，上手容易，但想要得到稳定的结果，还是要花一点心思的。
按照说明书要求选取和处理样品，如血清样品应避免使用溶血或凝固不全的样品。
样品稀释时，应首先保证样品已恢复至室温，选用一次性样品稀释板稀释样品，然后用排枪转移至ELISA板，保证样品孵育时间一致。禁止使用具有吸附性的细胞培养板。
合理安排检测量，避免ELISA板过多，造成洗板等待时间过长。
配置洗涤液的蒸馏水或去离子水也需提前回温。若环境温度较低，可置于25℃恒温箱内回温。
按说明书配置方法，现用现配。建议使用一次性离心管配制，涡旋振荡，充分混匀。
吸取液体时选用的移液器量程和所需量接近，添加通用试剂时可反向移液，减小误差。
样品开盖时尽量远离稀释板，防止液滴迸溅到稀释板孔中。
转移样品时稀释板在上，ELISA板在下，防止交叉污染。
加液结束后加盖封板膜，使用恒温恒湿培养箱（注意要提前打开培养箱，确保孵育时到达所需温度），若培养箱不能保证恒湿条件，可自制湿盒，避免培养箱内过于干燥，致使孔内样品蒸发。
洗涤时可使用自动洗板机或多通道移液器
手动洗板时，快速翻转ELISA板将孔内溶液甩出，避免孔间交叉污染。
每次加入洗涤液后，轻轻震荡ELISA板后甩出洗涤液，确保洗涤充分。
最后一次洗涤去除洗涤液前，确保下一步要添加的试剂可直接使用，勿使ELISA板处于干燥状态下的时间超过一定时限。
最后一次洗涤后，将ELISA板置于吸水纸上轻轻拍干。
底物溶液需避光放置，加样时动作迅速，板间加样时间差距不宜过大。室温下避光孵育。
加终止液时动作迅速，加完后充分混匀再读取数值。
加入终止液后5分钟内完成读数，避免因反应时间过长，影响实验结果的准确性。
读数前打开酶标仪，确保酶标仪充分预热通过自检，使结果更稳定。
酶标仪需定期校准，避免读数存在过大偏差。
⚠ 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
⚠ 试剂盒严格按照说明书规定温度（一般2-8℃）保存。
⚠ 使用微量移液器时，吸取不同的液体后要注意更换枪头，防止污染。
⚠ 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。
⚠ 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
⚠ 在储存和温育时避免强光直接照射。和检测装置。
ELISA实验现在已成为实验室最为常见的实验，几乎人人都能做，但真正做好的没有几个，究其原因就是步骤比较简单，一学就会，却往往抓不往关键，一个小环节的错误，最终会影响整个实验结果，注意以上这些可以帮助我们高效高质的完成ELISA试验。
